Раздел предназначен исключительно для медицинских и фармацевтических работников! Если Вы не являетесь медицинским и фармацевтическим работником - покиньте раздел! Условия использования
Циркулирующие и связанные антигены
Следующим важным фактором в реакции является определение оптимальной сорбирующей дозы антигена. С этой целью проведено шахматное титрование антигенов и сыворотки (|рв> 2). Для фиброзного, пульпозного антигенов оптимальной дозой оказалось разведение 1 : 50, антигена нервной ткани - 1 :20U. После каждого этапа планшеты тщательно отмывали 8 раз холодной проточной водой и дважды - в 0,03%-ном растворе твина-20.
Изучение зависимости степени сорбции антигенов (на твердой фазе) от величины рН буфера показало, что изоэлектрическая точка большинства белковых антигенов находится в интервале рН 9,0-9,6. При рН 9,2-9,6 осуществляется их «сшивание» с полистиролом. Однако, как свидетельствуют данные рисунка, при растворении антигенов в карбонатном буфере (рН 9,2 и 10,2) их фиксация была минимальной. Поэтому нами испытаны в качестве растворителя буферные смеси с кислой (рН 4,0; цитратный буфер) и слабощелочной (рН 7,2; буфер) реакциями. В кислом цитратном буфере сорбция антигенов не наблюдалась. Судя по титру антител в стандартной сыворотке, оптимальные условия для сорбции антигенов отмечены при рН, близком к нейтральному. Поэтому стадию их фиксации к основе нужно проводить в буфере с рН 7,2.
С целью выявления антигенов межпозвонковых дисков, периферического нерва сыворотку больного разводили двукратно (от цельной до 10240) и смешивали по 100 мкл с кроличьими антисыворотками (к соответствующим антигенам) в разведении, составляющем четырехкратный титр. Титрование проводили в отдельной планшете и абсорбировали антитела из антисыворотки. Для этого смесь инкубировали 60 мин при температуре 37 °С и образовавшиеся ИК осаждали центрифугированием в течение 15 мин при 1000 g. Полученный надосадок переносили в сенсибилизированные антигеном планшеты, инкубировали 1 ч при 37 °С и отмывали.
Следующая глава:
Качество сенсибилизации антигенами
Предыдущая глава:
Задачей настоящего исследования